淺析核酸檢測(cè)PCR試劑盒的作用與意義所在
瀏覽次數(shù):434發(fā)布日期:2022-08-15
核酸檢測(cè)PCR試劑盒和紫外凝膠成像系統(tǒng)(紫外分析儀或手提紫外等)以及移液器都可能影響PCR檢測(cè)的質(zhì)量。PCR儀是控制PCR反應(yīng)溫度變化的,其溫度和控制時(shí)間的準(zhǔn)確程度可能會(huì)影性PCR檢測(cè)質(zhì)量。移液器取液的準(zhǔn)確程度影響反應(yīng)體系是否能達(dá)到反應(yīng)環(huán)境。紫外分析系統(tǒng)對(duì)檢測(cè)敏感性有明顯的影響。紫外分析系統(tǒng)有3種類(lèi)型儀器:紫外分析儀、紫外凝膠成像系統(tǒng)、手提紫外燈。紫外分析儀直接用眼睛觀(guān)察瓊脂糖凝膠上DNA擴(kuò)增帶。
紫外凝膠成像系統(tǒng)是在計(jì)算機(jī)上通過(guò)攝像系統(tǒng)對(duì)瓊脂糖凝膠上DNA擴(kuò)增帶進(jìn)行觀(guān)察。手提紫外燈可以在電泳過(guò)程中直接對(duì)瓊脂糖凝膠上DNA擴(kuò)增帶進(jìn)行觀(guān)察,使用方便,分辨率比較低。依據(jù)這些儀器的分辨率由高到低順序是紫外分析儀、紫外凝膠成像系統(tǒng)、手提紫外燈。紫外分析儀有時(shí)能看到弱陽(yáng)性擴(kuò)增帶,在紫外凝膠成像系統(tǒng)上卻看不到。手提紫外燈只有在陽(yáng)性擴(kuò)增帶比較亮?xí)r才能看到,建議為保證檢測(cè)質(zhì)量建議不用手提紫外燈,可用于臨時(shí)的電泳結(jié)果觀(guān)察。
核酸檢測(cè)PCR試劑盒適用于以RNA為模板合成cDNA的反轉(zhuǎn)錄,以及后續(xù)的PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。選用優(yōu)異的M-MLVRT酶,可以合成大于5kb的cDNA;反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中的特異的RNase抑制劑可有效降低由于外源RNase污染而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗的風(fēng)險(xiǎn)。本試劑盒使用方便、快捷,可廣泛用于cDNA克隆及目的基因檢測(cè)等分子生物實(shí)驗(yàn)。
測(cè)定RNA濃度按以下步驟進(jìn)行操作:
(1)取1u1RNA原液,放在0.5mlEP管中,加入249u1ddH20,用移液槍反復(fù)混勻。
(2)用ddH20為空白對(duì)照,調(diào)節(jié)A260零點(diǎn)。
(3)倒掉比色杯中的水,加入稀釋并混合均勻的RNA樣液,測(cè)定A260值。倒掉比色杯中的RNA樣液,用ddH20沖洗比色杯,再調(diào)節(jié)A280零點(diǎn)。
(4)倒掉比色杯中的水,加入稀釋并混合均勻的RNA樣液,測(cè)定A280值。計(jì)算A260/A280比值,比值≥1.8,滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)要求。
(5)RNA原液濃度=A260×稀釋倍數(shù)×40(ng/u1)。