產(chǎn)品名稱 | 柏氏巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 | Babesia perroncitoi |
貨號 | CP933930 |
儲存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
探針法:
柏氏巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴增相關。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時,熒光基團發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應時,聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:
應用案例:
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20 μL 體系,在樣品制備室進行)
9.在 PCR 管中加入下列成分。
以下是公司正在銷售的產(chǎn)品:
碘克沙醇相關物質(zhì)E標準品小鼠狀腺素抗體(TAb)ELISA Kit,48T/96T
鄰碘代馬尿酸標準品大鼠狀腺素抗體(TAb)ELISA Kit,48T/96T
碘代對苯二酚標準品人糖原酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA Kit,48T/96T
碘海醇標準品小鼠糖原酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA Kit,48T/96T
碘海醇相關化合物A標準品大鼠糖原酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA Kit,48T/96T
碘海醇相關化合物B標準品雞催乳素(PRL)ELISA Kit,48T/96T
柏氏巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒碘海醇相關物質(zhì)C標準品人催乳素(PRL)ELISA Kit,48T/96T
碘帕醇標準品小鼠催乳素(PRL)ELISA Kit,48T/96T
碘帕醇相關物質(zhì)A標準品大鼠催乳素(PRL)ELISA Kit,48T/96T
碘帕醇相關物質(zhì)B標準品兔子催乳素(PRL)ELISA Kit,48T/96T
碘帕醇相關物質(zhì)C標準品人抵抗素(Resistin)ELISA Kit,48T/96T
碘普羅胺標準品小鼠抵抗素(Resistin)ELISA Kit,48T/96T
碘普羅胺相關物質(zhì)A標準品大鼠抵抗素(Resistin)ELISA Kit,48T/96T
碘普羅胺相關物質(zhì)B標準品人糖原酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA Kit,48T/96T
碘他拉酸標準品小鼠糖原酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA Kit,48T/96T EDRF1/C10orf137 紅細胞分化相關因子1抗體賴諾普利
EDNRB 內(nèi)皮素受體B抗體富馬酸喹硫平
EDNRA 內(nèi)皮素受體A抗體氨汀
EDIL3 表皮生長因子樣重復折疊1結構域蛋白3抗體曲昔匹特
EDG7/LPA3 溶血脂酸受體蛋白3抗體鹽酸萘替芬
EDG6/SLP4 內(nèi)皮細胞的分化蛋白6抗體碳酸鈣
EDG4/LPA2 溶血脂酸受體蛋白2抗體磺酸氨地平
EDG3 內(nèi)皮分化型G蛋白偶聯(lián)受體3抗體伏格列波糖
EDG2/LPA1 溶血脂酸受體蛋白1抗體琥珀酸潑尼龍
EDG1/CD363/S1P1 內(nèi)皮細胞分化鞘脂G蛋白偶聯(lián)受體1抗體潑尼龍
EDA2R/TNFRSF27 腫瘤壞死因子受體超家族成員27抗體萘磺酸右氧芬
ED-1 外胚層發(fā)育不良抗體六蜜胺
ECT2 上皮細胞癌轉化蛋白2抗體氧普胺
ECRG4/C2orf40 食道癌相關基因4蛋白抗體阿魏酸
ECP 嗜酸性粒細胞陽離子蛋白抗體纈沙坦對映異構體
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
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